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ELISA試劑盒的解決辦法

點(diǎn)擊次數(shù):1183 更新時間:2016-09-30

ELISA試劑盒的解決辦法
血清是zui常用的人ELISA試劑盒標(biāo)本,血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種,本文主要為大家介紹內(nèi)源性物質(zhì):
    內(nèi)源性物質(zhì): 有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
(1)類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與人ELISA試劑盒系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽性。
解決該情況的辦法是:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效);③檢測抗原時,可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。
(2)補(bǔ)體 ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,人ELISA試劑盒抗體分子發(fā)生變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,人ELISA試劑盒從而造成假陽性。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標(biāo)本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
(3)嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物Ig (s) ,但加入量不足或亞類不同時無效。

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